بررسی بیان ژن های خانواده hv tip در جو تحت تنش شوری

جو متحمل¬ترین گیاه به تنش شوری در بین غلات است و در گستره وسیعی از شرایط آب وهوایی قادر به رشد می¬باشد. گیاهان متحمل به شوری در انتقال سدیم در عرض تونوپلاست در شیب غلظت از سیتوپلاسم به واکوئل کارآمدتر هستند که این امر به گیاه امکان بقا و رشد را در غلظت¬های بالای شوری فراهم می¬کند. به منظور بررسی بیان ژن¬های خانواده hv tip (رمز کننده کانال¬های پروتئینی در طول غشاها، به ویژه در غشای واکوئلی) سه رقم جو clipper (حساس به شوری)، sahara3771 (متحمل به شوری) و ژنوتیپ امید بخش (متحمل به شوری)، در سه سطح صفر، 100 و 200 میلی¬مولار nacl در شرایط هیدروپونیک کشت خواهند شد. به منظور ارزیابی میزان تغییر بیان ژن¬های hv tip1;1، hv tip2;1، hv tip2;2، hv tip2;3 و hv tip4;1، نمونه¬های برگی برای استخراج rna در سه مرحله 24 ساعت، 3 روز و 3 هفته بعد از اعمال تنش برداشت خواهد شد. استخراجrna کل با استفاده از کیت استخراج انجام و برای حذف dna باقیمانده در نمونه¬های rna از dnase استفاده خواهد شد. کیفیت و کمیت نمونه¬ های rna توسط اسپکتروفتومتر و الکتروفورز ژل آگارز تعیین خواهد شد. ساخت cdna براساس دستورالعمل کیت با یک واحد آنزیم reverse transcriptase و مخلوط آغازگرهای الیگو dt و تصادفی (6 نوکلئوتیدی) صورت خواهد گرفت. cdnaهای ساخته شده به عنوان الگو جهت تکثیر برخی از ژن¬های خانواده hv tip در دمای 58 درجه سانتیگراد به کمک از آغازگرهای اختصاصی استفاده می¬شود. برای بررسی میزان بیان ژن¬های خانواده hv tip تحت تنش شوری از real-time pcr بر اساس آغازگرهای اختصاصی ژن¬ها و روشsybr-green استفاده خواهد شد.